近日，一項來(lái)自加利福尼亞生物醫學(xué)研究所（Calibr）Scripps Research的最新CAR-T科研進(jìn)展，發(fā)表在今年11月版的《美利堅合眾國國家科學(xué)院院刊》（PNAS）上。
2017年，Kymriah和Yescarta取得了巨大成功，該研究領(lǐng)域開(kāi)始蓬勃發(fā)展，CAR-T細胞療法大有前途，對于很多經(jīng)先前治療失敗的患者，它已做出了令人驚喜的反應。但伴隨著(zhù)這種成功，以細胞因子風(fēng)暴為代表性的副作用也浮出水面。所以，科學(xué)家們正試圖建立一種更安全，更有效的CAR-T藥物，利用患者自身的免疫系統來(lái)對抗癌癥。
論文中所提到的“可切換控制”的CAR-T療法平臺技術(shù)，或許是一種更具有希望的、能夠降低風(fēng)險的、并且更加有效的癌癥治療形式。Calibr的CAR-Ts版本以更自然的方式工作，可能會(huì )預防細胞因子風(fēng)暴和其他免疫相關(guān)的并發(fā)癥。
“可切換控制”的CAR-T療法平臺技術(shù)可以 “調整”T細胞的活動(dòng)，模仿T細胞的自然行為，通過(guò)使用基于抗體的開(kāi)關(guān)對CAR -T細胞活性進(jìn)行劑量滴定控制，以周期性方式選擇打開(kāi)和關(guān)閉，指導CAR-T細胞群進(jìn)行適宜的擴張和收縮。在這里可以利用可切換平臺的功能可逆性來(lái)通過(guò)開(kāi)關(guān)的循環(huán)劑量來(lái)結合“休息”階段，以便能夠在體內誘導強大的中央記憶群體。
現在，Calibr的研究結果指向更安全有效，在同源小鼠模型中也證明可切換平臺可以賦予抗腫瘤功效，同時(shí)解除長(cháng)期持續存在的慢性B細胞再生障礙等問(wèn)題。但研究還處于早期階段，預計將于2019年首次在人體中進(jìn)行試驗。
人源化小鼠CD19可切換CAR T平臺的描述和CD19開(kāi)關(guān)的體外活性
將PNE移植到人源化小鼠CD19（1D3）開(kāi)關(guān)的輕鏈（LC）或重鏈（HC）的N末端（N Term）或C末端（C Term）。建立了四個(gè)單價(jià)開(kāi)關(guān)（LCNT，LCCT，HCNT和HCCT）和兩個(gè)二價(jià)開(kāi)關(guān)（NTBV和CTBV），和無(wú)肽對照的WT開(kāi)關(guān)。隨后所有的體內研究均在人源化小鼠CD19 LCNT開(kāi)關(guān)內進(jìn)行。VL，VH，CL和CH分別表示所描繪的Fab的可變輕鏈，可變重鏈，恒定輕鏈和恒定重鏈。
體外評估sCAR設計
第二代sCAR構建體含有鼠CD28或鼠4-1BB作為共刺激分子，第三代構建體也包含兩者?；谑驝D28的鉸鏈被IgG4m鉸鏈或基于鼠CD8的鉸鏈替換。
圖表描繪了一式三份進(jìn)行的兩個(gè)合并實(shí)驗的數據。通過(guò)用Dunn的非參數多重比較檢驗完成的Kruskal-Wallis檢驗進(jìn)行統計學(xué)分析。顯示了平均值和SEM（* P <0.05，** P <0.01，和*** P <0.001; ns，不顯著(zhù)）。
在同系小鼠腫瘤模型中sCAR設計的體內功效和持久性
在第0天將C3H小鼠植入38c13細胞，并在D7用CTX預處理。第二天（D8），靜脈注射sCAR / CAR T細胞靜脈注射抗鼠CD19開(kāi)關(guān)劑量（或PBS溶液）在D8，D36和D63 / 64開(kāi)始，每隔一天以1 mg進(jìn)行8次劑量（灰色陰影）在2周開(kāi)/關(guān)（休息）循環(huán)中/ kg。（B - E）該研究通過(guò)評估鼠CD28與鼠4-1BB共刺激分子的比較來(lái)比較Ig-28z，Ig-BBz和Ig-28BBz的功效。（F - I）在本研究中，比較Ig-28BBz（1-3），Ig-28BBz和8-28BBz以評估IgG4m與基于CD8的鉸鏈和CD3ζ（WT）對CD3ζ（1-3） 。1D3 28z（1-3）用作對照（n = 5-6）。結合這兩個(gè)實(shí)驗的重復實(shí)驗顯示在SI附錄，圖S3中顯示均值和SD。Mann-Whitney檢驗的統計學(xué)分析表明在95％CI時(shí)有顯著(zhù)差異（** P <0.01）。
轉換給藥方案對sCAR T細胞擴增和表型的影響
用CTX預處理C3H小鼠，并在第二天用Ig-28BBz sCAR T細胞過(guò)繼轉移。在第（D）0天和在D28，每隔一天，在三種給藥方案中的一種中，在細胞輸注后開(kāi)始抗鼠CD19開(kāi)關(guān)劑量：1周/ 2kg的2周（8個(gè)劑量）（圖3和4中使用的參考條件）。 3和5），3周（12劑），0.2和5mg / kg（低/高），和1周（4劑），0.2和5mg / kg（低/高;灰色陰影/箭頭）。收集外周血并在D7，D25，D35，D53和D74（n = 5）分析B和sCAR T細胞。圖片顯示了兩個(gè)實(shí)驗重復的代表性實(shí)驗。顯示均值和SD。
sCAR T細胞在組織中的運輸
在用Ig-28BBz sCAR T細胞過(guò)繼細胞轉移之前，用CTX處理38c13荷瘤C3H小鼠。描述了一項研究的結果。Mann-Whitney檢驗的統計分析表明在95％CI時(shí)存在顯著(zhù)差異。數據顯示為SD的平均值（** P.<0.01和*** P <0.001; ns）。
在這項研究展示了可切換的，持久的sCAR-T細胞群的設計和植入。單獨的鼠4-1BB共刺激結構域，或與作為第三代構建體的鼠CD28共刺激結構域一起，在模型中實(shí)現腫瘤負荷和sCAR T細胞持續性的控制是必不可少的。在體內，基于4-1BB的構建體的sCAR T細胞擴增主要是sCAR + CD8 +，這與報道的4-1BB驅動(dòng)的細胞**T細胞擴增一致。擴增嚴格依賴(lài)于sCAR構建體中的功能完整的CD3ζ信號傳導結構域。
利用Ig-28BBz sCAR T細胞的持久性和正常B細胞上CD19的表達作為靶點(diǎn)，并讀出sCAR T細胞的功效，以開(kāi)發(fā)“自我接種/加強”方法誘導sCAR T細胞記憶。出于安全和B細胞再增殖的目的，控制sCAR T細胞群的其他方法包括使用殺傷開(kāi)關(guān)。sCAR T細胞平臺允許保留細胞，可以通過(guò)給藥過(guò)程用于促進(jìn)sCAR T細胞中的有利特征。此外，sCAR T細胞采用通用設計，可以定向至任何治療性抗原靶標。這在對抗由常規CAR T細胞療法觀(guān)察到的抗原丟失引起的腫瘤復發(fā)中是極其重要的。
我們期望這一“可切換控制”的CAR-T療法平臺技術(shù)，能夠早日實(shí)現臨床轉化，能夠以更具有希望、能夠降低風(fēng)險、并且更加有效的癌癥治療形式來(lái)造福癌癥患者.
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