近日，哈佛醫學(xué)院和波士頓兒童醫院的科學(xué)家們使用一種新的基因編輯方法，挽救遺傳性聽(tīng)力受損小鼠，并且沒(méi)有任何明顯的脫靶效應。
研究人員將攜帶有缺陷TMC1基因的小鼠稱(chēng)之為貝多芬小鼠。該基因的DNA序列中有一個(gè)錯誤——腺嘌呤A取代了胸腺嘧啶T，這會(huì )導致小鼠聽(tīng)力受損。在人體中，如果Tmc1基因發(fā)生突變會(huì )導致聽(tīng)力逐漸喪失，甚至在25歲左右失聰。
新的CRISPR系統精準切割
哈佛醫學(xué)院Blavatnik研究所的科學(xué)家改進(jìn)了傳統的CRISPR -Cas9系統，更好地識別引起耳聾的基因突變。傳統CRISPR-Cas9基因編輯系統是通過(guò)引導分子gRNA來(lái)識別靶突變體DNA序列。一旦確定了目標DNA，切割酶Cas9就會(huì )剪斷它。
但是CRISPR的準確度并非完美無(wú)缺，傳統Cas9酶并不能完全精確地到達靶點(diǎn)位置指導RNA切割，很有可能造成脫靶現象。
為了解決這個(gè)問(wèn)題，研究人員開(kāi)發(fā)新的基因編輯系統，它替換了傳統來(lái)源于釀膿鏈球菌的Cas9酶，采用了源于金黃色葡萄球菌的Cas9酶。
準確切割，無(wú)脫靶效應
在初步試驗中，研究人員對含有Tmc1基因變異的細胞進(jìn)行觀(guān)察發(fā)現，修改后的基因編輯系統能夠準確區分突變的DNA和Tmc1基因副本中正常的DNA。進(jìn)一步分析顯示，在包含有一個(gè)缺陷基因和一個(gè)正?；虻募毎?，至少有99% 的CRISPR-Cas9切割只發(fā)生在缺陷基因拷貝中。
接下來(lái)，研究人員將基因編輯療法注射到小鼠的內耳中。DNA分析表明，基因編輯活動(dòng)只發(fā)生在貝多芬缺陷小鼠的內耳細胞中。在沒(méi)有基因變異的小鼠內耳細胞中沒(méi)有檢測到基因編輯的跡象，這一發(fā)現證實(shí)了該工具的準確性。
為了確定基因編輯療法是否干擾了正常的基因功能，科學(xué)家刺激沒(méi)有Tmc1基因缺陷同樣接受治療的小鼠的聽(tīng)覺(jué)細胞。結果顯示并小鼠的聽(tīng)力并沒(méi)有異常，這證明基因編輯療法對正?；蚬δ軟](méi)有影響。
聽(tīng)力恢復與健康老鼠無(wú)差別
為了證明這種療法不僅僅是對細胞有效，研究人員還對小鼠進(jìn)行了聽(tīng)力黃金標準測試。他們測量了小鼠的聽(tīng)覺(jué)腦干反應，他們捕捉了內耳毛細胞傳遞到大腦的聲音量。
檢測發(fā)現，接受基因編輯治療兩個(gè)月后，貝多芬小鼠的聽(tīng)力明顯好于未接受基因突變治療的小鼠。經(jīng)過(guò)治療的老鼠能夠探測到45分貝左右的聲音，這相當于正常談話(huà)的音量，與健康老鼠幾乎沒(méi)有區別。更令人鼓舞的是，接下來(lái)近一年中小部分經(jīng)過(guò)治療的貝多芬小鼠情況穩定，接近正常的聽(tīng)力。
如果不進(jìn)行治療，貝多芬小鼠會(huì )在在6個(gè)月大時(shí)就完全失聰。相比之下，沒(méi)有遺傳缺陷的老鼠一生都能保持正常的聽(tīng)力，并能探測到30分貝左右的聲音。
波士頓兒童醫院耳鼻喉科和神經(jīng)病學(xué)教授Jeffrey Holt表示：“我們的工作為由一個(gè)缺陷基因副本引起的遺傳疾病打開(kāi)了一扇精準治療的大門(mén)。當然這只是萬(wàn)里長(cháng)征的第一步。不過(guò)我們證明了，這種高度特異性、高度靶向的治療方法可以被開(kāi)發(fā)出來(lái)，選擇性地抑制攜帶單個(gè)基因突變。這有望治療更多其他形式的人類(lèi)疾病。”
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