上篇回顧：《抗體技術(shù)的研發(fā)現狀與進(jìn)展（上篇）》
隨著(zhù)現代生物技術(shù)的不斷發(fā)展，結合抗體藥物的生物學(xué)特性，研發(fā)人員在傳統抗體技術(shù)的基礎上不斷優(yōu)化創(chuàng )新，力求通過(guò)更簡(jiǎn)便快速的方法，獲得免疫原性更低、人體相容性更好及成本更低的治療性抗體。
3、轉基因小鼠技術(shù)
轉基因小鼠技術(shù)是應用基因工程技術(shù)破壞小鼠內源抗體基因，然后將人抗體基因轉入小鼠體內，再使用目標抗原免疫轉基因小鼠，從而在其體內表達相應抗體的技術(shù)。該技術(shù)使抗原抗體免疫反應在小鼠體內進(jìn)行，保證了抗體類(lèi)別轉換的完整性、抗體克隆選擇的多樣性及抗體親和力成熟的自然機制，因此利用該技術(shù)得到的抗體具有良好的親和性、穩定性和可溶性等。該技術(shù)體系難度較大，技術(shù)門(mén)檻高的特點(diǎn)，僅有少數公司掌握，主要有XenoMouse，UltiMab，VelociImmune和Kymab等轉基因小鼠。XenoMouse小鼠、UltiMab小鼠、VelociImmune小鼠和 Kymab 小鼠分別是美國 Cell Genesys 公司、Medarex 公司和再生元（Regeneron）公司及英國Kymab公司研究人員培育而成。XenoMouse小鼠與 UltiMab 小鼠作為第一代轉基因小鼠，技術(shù)類(lèi)似，均轉入了人 IgH 和 Igκ 的主要基因，同時(shí)小鼠自身的IgH和Igκ失活。VelociImmune小鼠和Kymab小鼠類(lèi)似，將小鼠的IgH和Igκ的V區精確地替換為對應的人IgH和Igκ的V區，同時(shí)保留了小鼠自身所有C區和其他基因表達調控原件。
2006年，第一種藥物 Panitumumab 被批準用于 RAS 野生型轉移性結直腸癌；同樣來(lái)源于XenoMouse平臺的還有2 種用于自身免疫性皮膚病的人抗：IL?17α抗體Secukinumab 以及 IL?17R 抗體 Brodalumab，分別于2015年和2017年獲得美國FDA批準用于銀屑病治療。HuMabMouse開(kāi)發(fā)的兩種抗體Ipilimumab（CTLA?4 抗體）和 Nivolumab（PD?1 抗體）被用于黑色素瘤治療，分別于2011年和2014年獲批。其中Nivolumab還于 2018 年被批準用于非小細胞肺癌；此外，Ustekinumab與細胞因子如IL?12和IL?23的p40亞單位結合，阻斷促炎信號以減輕炎癥，該藥于2009年被批準用于嚴重斑塊狀銀屑病，2016年被批準用于克羅恩病。Velocimune小鼠是第二代鼠恒定區嵌合的人源化小鼠，輔助開(kāi)發(fā)了IL?4R抗體Dupilumab和IL?6R抗體Sarilumab，分別用于濕疹和類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節炎的治療，這兩種藥物均于2017年獲得批準。2020 年，美國 FDA 批準的首 個(gè)埃博拉抗體療法因馬澤布（inmazeb）即利用轉基因小鼠技術(shù)研發(fā)。COVID-19 疫情期間，美國再生元公司也利用該轉基因小鼠技術(shù)開(kāi)展了新型冠狀病毒中和抗體的研發(fā)工作。
目前，我國研究團隊也在積極建立轉基因小鼠相關(guān)研發(fā)體系。和鉑醫藥公司培育了 Harbour 小鼠，擁有 H2L2 和 HCAb 2 個(gè)品系。H2L2 小鼠能產(chǎn)生具有 2 條全人源重鏈和輕鏈的單克隆抗體，HCAb小鼠能產(chǎn)生獨特的具有全人源可變區片段的重鏈抗體。重慶市畜牧科學(xué)院培育了 CAMouse小鼠，擁有全人抗體轉基因小鼠CAMouseHG和全人單域抗體轉基因小鼠CAMouseH 2個(gè)品系。
4、單細胞測序技術(shù)
單細胞測序技術(shù)即單個(gè)B淋巴細胞抗體制備技術(shù)，是近年來(lái)新發(fā)展的一類(lèi)快速制備單克隆抗體的技術(shù)，是根據每個(gè) B 細胞只含有 1 個(gè)功能性重鏈可變區 DNA 序列和 1 個(gè)輕鏈可變區 DNA 序列，以及每個(gè) B 細胞只產(chǎn)生 1 種特異性抗體的特性，將單細胞分離鑒定技術(shù)結合 PCR 技術(shù)形成的一種全人源單克隆抗體的體外表達系統。單細胞測序技術(shù)產(chǎn)生的抗體具有全人源性、高度抗原特異性、親和性高和基因多樣性豐富等優(yōu)勢，被廣泛應用于腫瘤治療、病原微生物感染治療、自身免疫疾病檢測和治療及人類(lèi)免疫系統研究等各個(gè)領(lǐng)域。單細胞測序技術(shù)可以實(shí)現高通量篩選和測序，目前在抗體藥物篩選領(lǐng)域應用日趨廣泛，暫無(wú)獲批上市的藥物，但有多個(gè)利用該技術(shù)研發(fā)的藥物正處于臨床試驗階段，如擬用于治療巨細胞感染的司韋單抗（sevirumab）和治療癌癥的普林木單抗（pritumumab）等。其中，由美國渤?。˙iogen）生物技術(shù)公司研發(fā)的阿杜卡尼單抗（aducanumab）備受關(guān)注，該單抗是一種靶向寡聚 β 淀粉樣蛋白、用于治療阿爾茨海默病的研究性藥物。該公司于2020年7月向 FDA提交了阿杜卡尼單抗生物制品許可申請，美國FDA于2020年8月受理，并授予了優(yōu)先審查，目前正在同時(shí)接受歐盟和日本監管機構的審查。
COVID-19疫情期間，單細胞測序技術(shù)也成為研發(fā)新冠病毒中和抗體的主流技術(shù)，美國禮來(lái)（Eli Lilly）公司聯(lián)合加拿大 AbCellera Biologics公司、韓國國立保健研究院等團隊，以及中國科學(xué)院微生物研究所、清華大學(xué)和北京大學(xué)等多個(gè)中國團隊開(kāi)展相關(guān)研究，其中LY-CoV555（美國禮來(lái)公司團隊研發(fā)）和JS016（中國科學(xué)院微生物研究所團隊研發(fā)）組成的中和抗體聯(lián)合療法于 2021 年2月9日獲批美國FDA緊急使用授權。
不同抗體技術(shù)優(yōu)劣勢分析
雜交瘤單克隆抗體技術(shù)、抗體文庫展示技術(shù)、轉基因小鼠技術(shù)和單細胞測序技術(shù)作為4種常用的抗體技術(shù)，各自具有不同的優(yōu)勢和劣勢。雜交瘤單克隆抗體技術(shù)成熟、方便、成本低，但是僅能用于鼠源抗體篩選，且鼠源抗體能夠被人體免疫系統識別，引起嚴重的不良反應，因此利用雜交瘤技術(shù)篩選得到抗體通常需要進(jìn)一步進(jìn)行人源化改造。與雜交瘤單克隆抗體技術(shù)相比，抗體文庫展示技術(shù)省去了細胞融合的步驟，擴大了篩選容量，可以直接得到人源化抗體基因，且隨著(zhù)抗體文庫展示技術(shù)的快速發(fā)展，不斷衍生出體內、體外、真核等不同的表達系統，為篩選鑒定特異性抗體提供了更多方便的平臺。但目前抗體文庫展示技術(shù)仍不能廣泛用于完整 IgG 抗體的展示，需要先片斷化展示后重建完整抗體分子，易篩選到非特異性的結合或親和力低下的抗體，且抗體庫難以?xún)Υ婧瓦\輸，是相關(guān)科研材料共享的一大阻礙。在美國 FDA 已批準上市的抗體藥物中，利用該技術(shù)篩選的僅占約10%。盡管首 個(gè)全人源抗體來(lái)自噬菌體展示技術(shù)，但轉基因小鼠技術(shù)仍是目前全人源抗體藥物領(lǐng)域應用最廣泛的主流技術(shù)，具有高效、快速和對人體蛋白具有較好的免疫原性等優(yōu)點(diǎn)。利用該技術(shù)產(chǎn)生的抗體整體上成功率更高，已研發(fā)出治療銀屑病、黑色素瘤和高膽固醇血癥等多種疾病的全人源單克隆抗體。單細胞測序技術(shù)具有快速、高通量、不受轉化效率的限制等優(yōu)點(diǎn)，可直接從B細胞篩選全人源性、高特異性、高親和性的抗體，且隨著(zhù)一些先進(jìn)儀器用于單細胞測序平臺，該技術(shù)已成為篩選病毒類(lèi)抗原抗體的主流技術(shù)。
參考資料
[1]武瑞君,桑曉冬,李治非,敖翼,范玲.抗體技術(shù)的研發(fā)現狀與展望[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志,2021,35(05):374-381.
[2]馮健男,喬春霞.人源治療性抗體研發(fā)技術(shù)進(jìn)展[J].南京醫科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2020,40(11):1571-1574.
作者簡(jiǎn)介：
小米蟲(chóng)，藥品質(zhì)量研究工作者，長(cháng)期致力于藥品質(zhì)量研究及藥品分析方法驗證工作，現就職于國內某大型藥物研發(fā)公司，從事藥品檢驗分析及分析方法驗證
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