當前免疫學(xué)研究多采用免疫健全的小鼠模型，小鼠原代免疫細胞已成為關(guān)鍵工具。然而，小鼠原代免疫細胞的基因轉染一直面臨低效率、高死亡率等技術(shù)難題?，F有的轉染方法（如慢病毒、電轉、脂質(zhì)體等）在這些細胞中效果不佳，特別是在基因編輯等涉及大片段基因遞送的研究中，這一瓶頸尤為明顯。
為突破這一技術(shù)難關(guān)，西湖凝聚體與西湖大學(xué)的研究團隊聯(lián)合開(kāi)發(fā)了 ProteanFect CRISPRMax 小鼠免疫細胞轉染試劑盒。該創(chuàng )新系統采用全新核酸遞送策略，成功解決了傳統方法的局限，能夠高效遞送大片段核酸，實(shí)現小鼠原代免疫細胞的高效基因編輯。
用戶(hù)親證：在小鼠原代 T 細胞中實(shí)現高達 97% 的基因編輯效率
圖1. ProteanFect CRISPRMax實(shí)現在小鼠原代T細胞的高效基因編輯
上述結果來(lái)源于陸軍軍醫大學(xué)的研究者，研究中使用了 ProteanFect CRISPRMax 小鼠免疫細胞轉染試劑盒（PT06）。在該實(shí)驗中，小鼠原代 T 細胞共轉染了 Cas9 mRNA、目的基因 sgRNA 和 EGFP-mRNA（其中EGFP mRNA用于目標細胞的篩選），成功實(shí)現了以下效果：
1、高轉染效率：在總細胞中，79.5% 的細胞實(shí)現目的基因敲除；而在 EGFP 陽(yáng)性 T 細胞中，97% 的細胞實(shí)現目的基因敲除，基因敲除效果顯著(zhù)。
2、高效共轉：可利用篩選標簽（如EGFP、Puro等）方便地富集成功基因編輯的細胞。
3、低細胞毒性：實(shí)驗結果顯示，轉染后的小鼠T細胞生存率高，且生理功能未受影響。
ProteanFect 何以如此高效？
ProteanFect 創(chuàng )新基因遞送方式
ProteanFect CRISPRMax 采用了一種創(chuàng )新的生物分子凝聚體技術(shù)：ProteanFect 通過(guò)將蛋白分子和核酸自組裝成一種規則的納米顆粒，這些納米顆粒能夠通過(guò)細胞的主動(dòng)內吞機制進(jìn)入細胞內部。這些顆粒穩定而功能強大，可以保護 mRNA 免于降解并保持其活性。此外，這種設計無(wú)需額外的化學(xué)修飾，從而減少了細胞毒性，顯著(zhù)提升實(shí)驗的安全性。
圖2. ProteanFect蛋白分子與mRNA可在體外自組裝形成蛋白納米顆粒
ProteanFect CRISPRMax Cas9 基因編輯原理
1、通過(guò)共轉染 Cas9 mRNA 與 sgRNA，成功表達 Cas9 蛋白。
2、Cas9 蛋白與 sgRNA 在細胞內自組裝形成 RNP 復合物。
3、RNP 復合物進(jìn)入細胞核并實(shí)現高效基因編輯。
圖3. ProteanFect核酸遞送原理示意圖
ProteanFect與傳統技術(shù)的對比
ProteanFect 無(wú)需使用病毒載體或電轉技術(shù)，避免了病毒可能帶來(lái)的免疫反應和安全風(fēng)險，也避免了電轉對細胞的損傷。ProteanFect 與其他常用轉染方法的對比：
ProteanFect CRISPRMax Cas9 基因編輯卓越優(yōu)勢：
圖4. 使用ProteanFect CRISPRMax Cas9試劑盒在人原代T細胞和小鼠原代T細胞中實(shí)現高效基因標記，基因編輯效率范圍為67%-88%。
ProteanFect 的廣泛應用
ProteanFect 不僅在小鼠原代T細胞中表現卓越，還能應用于以下領(lǐng)域：
圖5. 用戶(hù)對于ProteanFect的認可
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