摘要：siRNA治療方法已獲得廣泛關(guān)注，目前已有六種siRNA獲準用于臨床應用。盡管它們被研究用于治療代謝、心血管、傳染性和罕見(jiàn)遺傳疾病，以及癌癥和中樞神經(jīng)系統（CNS）疾病，但依然存在幾個(gè)藥物可用性挑戰。在這里，我們提供有關(guān)這些挑戰的深入討論，包括靶向積累和細胞攝?。?進(jìn)入'）、內溶酶體逃逸（'逃逸'）以及體內藥效表現（'療效'）--這三個(gè)'E'挑戰，同時(shí)也闡明siRNA藥物開(kāi)發(fā)。此外，我們提出幾種有前景的策略，這些策略在促進(jìn)siRNA治療藥物臨床轉化方面具有巨大潛力，包括探索多樣的配體-siRNA結合物、擴大潛在疾病靶點(diǎn)，以及開(kāi)掘新的修飾幾何形狀，以及開(kāi)發(fā)組合療法。

       文章亮點(diǎn)：

       1.理論上，siRNA能夠靶向任何感興趣的基因，潛在地解決那些對小分子和蛋白質(zhì)而言'無(wú)法藥物化'的疾病靶標。

       2.目前，已有六種siRNA治療藥物獲得臨床使用批準，以及大約20種其他候選藥物已進(jìn)入臨床研究的后期階段。

       3.靶向累積和細胞攝?。ㄟM(jìn)入）、內溶酶體逃逸（逃避）以及體內藥理學(xué)性能（療效）（三個(gè)'E'挑戰）是siRNA藥物開(kāi)發(fā)中最關(guān)鍵的瓶頸。

       4.配體綴合的siRNA是有前景的平臺，已經(jīng)在強健的肝外遞送方面取得了突破。復雜且適當的化學(xué)修飾可能會(huì )在siRNA方式的穩定性和長(cháng)期療效方面帶來(lái)驚人的突破。

       【NO.1】siRNA治療的蓬勃發(fā)展

       從制藥歷史的角度來(lái)看，小分子藥物作為最早開(kāi)發(fā)和應用的治療方式，享用了超過(guò)一個(gè)世紀的使用，而蛋白質(zhì)和抗體相對較晚出現，并且研究了將近半個(gè)世紀。盡管核酸分子作為一種新型治療方法的發(fā)展時(shí)間較短（20-30年），但它們已經(jīng)引起了制藥行業(yè)的顯著(zhù)全球關(guān)注，成為第三種最顯著(zhù)的治療方式。核酸藥物仍在快速探索和開(kāi)發(fā)中，特別是在RNAi領(lǐng)域，其廣泛而深遠的治療潛力日益顯現?？紤]到這一點(diǎn)，我們相信即將到來(lái)的時(shí)期將是核酸的一個(gè)關(guān)鍵時(shí)代，既擴大了治療選擇的范圍，也為該領(lǐng)域提供了新可能性。

       與傳統的小分子藥物和抗體相比，siRNA（見(jiàn)詞匯表）具有豐富的疾病靶點(diǎn)、高開(kāi)發(fā)成功率、短開(kāi)發(fā)時(shí)間、強大且持久的療效，以及平臺化模式的卓越特征。目前，六種siRNA藥物（patisiran、givosiran、lumasiran、inclisiran、vutrisiran和Rivfloza）已成功商業(yè)化。盡管siRNA藥物在臨床實(shí)踐中的應用前景廣泛，但其開(kāi)發(fā)面臨關(guān)鍵挑戰，包括靶向積累和細胞攝?。ㄟM(jìn)入）、內溶酶體逃逸（逃逸）和體內藥效（療效）（三大"E"挑戰）。在本文中，我們闡述了siRNA治療的當前狀態(tài)和未來(lái)前景，概括了該領(lǐng)域所遇到的關(guān)鍵挑戰，并提出了一系列應對策略。通過(guò)提供廣泛的見(jiàn)解和靈感，本文旨在為科學(xué)和制藥界提供有價(jià)值的指導。

       【NO.2】siRNA療法的最新研究和開(kāi)發(fā)狀態(tài)

       近年來(lái)，siRNA療法在多個(gè)候選藥物的前臨床和臨床研究開(kāi)發(fā)中顯示出了巨大的潛力。截至2023年8月，全球范圍內有15種在臨床二期或后期階段的研究siRNA藥物（表1），涵蓋廣泛的治療領(lǐng)域，包括罕見(jiàn)疾病和遺傳性疾病，并擴展到常見(jiàn)疾病。主要制藥公司已擴大其研究重點(diǎn)，以涵蓋代謝性疾病、心血管疾病、乙型肝炎和癌癥等常見(jiàn)病。例如，ALN-AGT（NCT04936035i，NCT05103332ii，隨機）目前正在開(kāi)發(fā)中，用于治療高血壓，并已進(jìn)入二期臨床試驗。Olpasiran（NCT05581303iii，隨機）旨在治療動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，正在進(jìn)行三期研究。SLN360（NCT05537571iv，隨機）是一種降脂siRNA，已進(jìn)入二期研究。RBD1016（NCT05961098v，隨機）是一種用于治療乙型肝炎的N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）結合siRNA，將在歐洲開(kāi)始二期試驗。STP705和STP707由兩種siRNA組成，靶向轉化生長(cháng)因子β1（TGF-β1）和環(huán)氧合酶2（COX-2），并以肽納米粒（PNPs）形式制備。STP705局部施用到病變組織中，以治療原位鱗狀細胞癌（isSCC）（NCT04844983vi，二期，隨機）和基底細胞癌（BCC）（NCT04669808vii，二期，非隨機），而STP707（NCT05037149viii，一期，非隨機）則通過(guò)靜脈注射到身體中，用于治療幾種實(shí)體瘤和纖維化肝病，例如原發(fā)性硬化性膽管炎（PSC）。

       表1.選定的商業(yè)化或晚期研究的siRNA療法

       從產(chǎn)品管道的角度來(lái)看，siRNA療法的一個(gè)顯著(zhù)突破在于其擴展到肝外疾病，包括小分子藥物和抗體藥物一直未能涉足的領(lǐng)域，如中樞神經(jīng)系統疾病。ALN-APP（NCT05231785ix，第一階段，隨機）是一種經(jīng)椎管內給藥的siRNA，靶向淀粉樣前體蛋白（APPs），用于治療阿爾茨海默?。ˋD）和腦淀粉樣血管?。–AA）。最近，ALN-APP的第一階段研究在單藥劑量遞增試驗中獲得了積極的中期結果。ARO-SOD1（NCT05949294xi，第一階段，隨機）是一種針對中樞神經(jīng)系統內超氧化物歧化酶1（SOD1）的研究性siRNA，可能用于治療由SOD1突變引起的肌萎縮側索硬化癥（ALS），目前正在進(jìn)行第一階段研究。此外，臨床開(kāi)發(fā)的RNAi療法正在向將siRNA遞送到其他組織（如眼睛、肌肉、肺部和脂肪）邁進(jìn)。Tivanisiran（SYL1001）（NCT03108664xii，NCT04819269xiii，隨機）目前正在進(jìn)行第三階段臨床研究，以治療干眼癥。ARO-DUX4（第一/第二階段）用于治療面肩肱肌營(yíng)養不良（FSHD）已提交臨床試驗。ARO-MUC5AC（NCT05292950xv，第一階段，隨機）、ARO-RAGE（NCT05276570xvi，第一階段，隨機）和ARO-MMP7（NCT05537025xvii，第一/二a階段，隨機）目前正在研究用于治療肺部疾病。

       值得注意的是，siRNA的給藥頻率已經(jīng)實(shí)現了歷史性的突破。siRNA的增強穩定性修飾使其能夠在體內持久抑制基因和治療效果，同時(shí)避免潛在的序列依賴(lài)性非特異性效果。例如，Leqvio在頭三個(gè)月只需給藥兩次，隨后每六個(gè)月治療一次，以有效管理原發(fā)性高膽固醇血癥或混合性脂質(zhì)異常。

       目前，全球有超過(guò)100家公司從事siRNA領(lǐng)域，其中大約30家公司專(zhuān)注于siRNA藥物開(kāi)發(fā)。根據Informa Pharma Intelligence的生物追蹤記錄，目前大約有200種基于siRNA/RNAi的藥物正在進(jìn)行臨床前和臨床研究。自2016年以來(lái)，共有14種siRNA和反義寡核苷酸（ASO）獲得批準商業(yè)化。此外，寡核苷酸治療領(lǐng)域在并購方面也見(jiàn)證了顯著(zhù)活動(dòng)。近年來(lái)，在心血管和代謝疾病、神經(jīng)系統疾病和乙型肝炎等領(lǐng)域有一些值得注意的許可協(xié)議。代表性的siRNA遞送平臺包括脂質(zhì)納米顆粒（LNP）、GalNAc-siRNA偶聯(lián)物（GalAheadTM、PDoV-GalNAc等）、GEMINI、?TRiM?、PNP、RIBO-GalSTAR?和RIBO-OncoSTAR，而IKARIA?的建立是為了開(kāi)發(fā)長(cháng)效siRNA。

       【NO.3】siRNA臨床研究的瓶頸

       盡管siRNA藥物研究取得了重大進(jìn)展，但仍存在一些需要克服的關(guān)鍵挑戰。具體來(lái)說(shuō)，三個(gè)"E"挑戰（進(jìn)入、逃逸、療效）是限制siRNA臨床翻譯和應用的三個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題。

       圖1.限制siRNA臨床翻譯和應用的三個(gè)"E"挑戰

       3.1進(jìn)入挑戰：靶向積累和細胞攝取

       第一個(gè)挑戰是在靶器官/組織中實(shí)現siRNA的高效富集并有效內化到靶細胞中（圖1A）。由于它們的大尺寸和陰離子電荷，未修飾的裸siRNA顯示出低生物利用度，半衰期短至幾分鐘。納米載體封裝的siRNA通常與血清蛋白結合，導致網(wǎng)狀上皮系統（RES）攝取和吞噬清除。此外，siRNA可被血漿、組織和細胞質(zhì)中存在的核酸酶或磷酸酶快速降解。全身清除后，siRNA必須穿過(guò)毛細血管的內皮才能進(jìn)入組織，由于廣泛的粘附和緊密連接，這尤其具有挑戰性。盡管siRNA可能被動(dòng)地積累在肝臟或腫瘤組織等多孔部位，但將這些治療劑輸送到優(yōu)先吸收這些分子的器官以外的身體其他部位，以及血液-腦屏障（BBB）和血液-視網(wǎng)膜屏障等屏障的有效穿越，仍然面臨巨大的挑戰。

       3.2逃逸激發(fā)試驗：內體和溶酶體逃逸

       第二個(gè)挑戰是如何實(shí)現有效的內體和溶酶體逃逸。雖然siRNA可以通過(guò)內吞作用進(jìn)入細胞，但只有不到1%的siRNA可以從內吞作用中逃逸，被動(dòng)siRNA逃逸率低于0.01%。去唾液酸糖蛋白受體（ASGPR）是一個(gè)明顯的例外，其肝細胞表達水平約為500000或更高，循環(huán)時(shí)間不到20分鐘。足夠的GalNAc-siRNA偶聯(lián)物可以在肝細胞的細胞質(zhì)中積累，以在治療期間達到治療水平。雖然這為未來(lái)基于RNAi的肝臟治療靶向帶來(lái)了希望，但siRNA逃逸對于其他類(lèi)型的細胞來(lái)說(shuō)仍然是一個(gè)未解決的問(wèn)題。大多數表面受體的表達范圍為10000-100000或更短，受體回收時(shí)間大約或超過(guò)90分鐘（圖1B）。由于細胞質(zhì)和內體中siRNA的降解，觀(guān)察到在任何給定時(shí)刻，只有極小的內吞GalNAc-siRNA偶聯(lián)物存在于體內細胞質(zhì)中。值得注意的是，雖然內體包埋的RNA治療藥物起到了作用，從而維持了較長(cháng)的單劑量反應持續時(shí)間，但這一優(yōu)勢被很大一部分無(wú)法穿透細胞質(zhì)的內吞RNA治療藥物所抵消。因此，雖然內體的釋放確實(shí)是抑制RNA療法在人類(lèi)疾病治療中更廣泛應用的主要障礙，但值得注意的是，需要有一種平衡，以在一定程度上維持貯存效應，確保長(cháng)時(shí)間的持續反應。

       迄今為止，試圖使用改良的pH敏感性、離子穿透劑、氯喹樣溶酶體試劑、成孔肽如蜂毒肽、十二烷基磷酸膽堿（DPC）和/或GalNAc偶聯(lián)的蜂毒肽樣肽（NAG-MLP）來(lái)增強內體逃逸，但尚未完全解決細胞毒性與內體逃逸增加之間的關(guān)系。

       3.3療效挑戰：體內藥物性能

       第三個(gè)挑戰是要求良好的體內穩定性、持久效果和安全性。使用病毒載體進(jìn)行體內核酸遞送有一些毒副作用和目前主要限于臨床前研究?；瘜W(xué)合成的載體系統，如陽(yáng)離子脂質(zhì)和大多數無(wú)機納米顆粒，可在體內誘導細胞凋亡和炎癥。給藥系統還必須確保生產(chǎn)、質(zhì)量控制和運輸的便利性，以實(shí)現大規模臨床應用。此外，目前RNA藥物臨床前研究中廣泛使用的小鼠模型并不是毒性評價(jià)模型，因為從小鼠模型獲得的RNA劑量反應關(guān)系不能直接應用于人類(lèi)。非靈長(cháng)類(lèi)動(dòng)物模型通常缺乏與人類(lèi)的基因組序列的足夠重疊來(lái)預測藥效學(xué)效應，因此有必要擴大非人靈長(cháng)類(lèi)動(dòng)物（NHP）模型的使用，或者作為潛在的選擇，擴大與疾病相關(guān)的類(lèi)器官的使用。未經(jīng)修飾的寡核苷酸通常在體內不穩定，并且很容易被血液中的核酸酶降解。此外，外源寡核苷酸可能在體內顯示免疫原性并引起免疫反應。隨著(zhù)技術(shù)的突破，化學(xué)修飾【例如，對硫代磷酸鹽（PS）骨架、核糖和鏈末端的修飾】已被廣泛用于增強siRNA的穩定性，減少/消除脫靶效應和免疫原性，從而提高siRNA的"功效"（圖1C）。通過(guò)復雜的修飾，siRNA已成功實(shí)現99%的基因沉默并在體內持續存在，允許低劑量季度、半年甚至每年給藥?；瘜W(xué)修飾的進(jìn)化史及其對siRNA功效的影響是一個(gè)令人著(zhù)迷的研究領(lǐng)域，值得進(jìn)一步全面探索。

       然而，盡管取得了這些可喜的成就，但仍存在一些挑戰。例如，修飾誘導的穩定性和特異性增強可能會(huì )降低沉默活性或引起意想不到的不良反應（圖1D）。此外，在臨床前和臨床研究中，都需要仔細評估siRNA的免疫原性和毒性（包括脫靶誘導毒性）。更重要的是，一系列專(zhuān)利家族對siRNA藥物開(kāi)發(fā)的知識產(chǎn)權格局做出了重大貢獻。例如，WO2016028649概述了一種幾何結構，該幾何結構將siRNA的兩條鏈的修飾劃分為由核苷酸計數的特定范圍定義的不同區域，從而提供每個(gè)區域的修飾單體的化學(xué)結構或物理化學(xué)性質(zhì)。WO2013074974描述了一種dsRNA雙鏈體，其基序由一條或兩條鏈中三個(gè)連續核苷酸上的三個(gè)相同修飾組成，特別是在切割位點(diǎn)附近。此外，WO2018185241重點(diǎn)介紹了反義鏈5'端2位和14位核苷酸的修飾策略，以及正義鏈上的核苷酸，對應于反義鏈的11、13、11和13或11-13位。這些專(zhuān)利對siRNA藥物開(kāi)發(fā)構成了重大障礙，必然需要該領(lǐng)域的其他實(shí)體建立獨特的技術(shù)。

       【NO.4】克服三個(gè)"E"挑戰的有前途的策略

       為了應對這些挑戰并推動(dòng)siRNA療法的發(fā)展，幾種有前途的策略或方法值得探索。

       圖2.克服三個(gè)"E"挑戰的有前途的方法

       4.1開(kāi)發(fā)新型化學(xué)修飾

       優(yōu)化化學(xué)修飾是提高siRNA穩定性、特異性、安全性和生物利用度的重要方向。這包括開(kāi)發(fā)新的化學(xué)修飾單體、修飾模式和RNAi觸發(fā)結構（圖2A-C）。傳統的siRNA修飾主要涉及2′-O-甲基化（2′-OMe）、2′-氟脫氧核糖核苷酸（2′-F）和PS，而新型修飾單體和修飾模式的開(kāi)發(fā)將進(jìn)一步完善siRNA的藥代動(dòng)力學(xué)和安全性。例如，已經(jīng)開(kāi)發(fā)了新型單體，如乙二醇核酸（GNA）和5′-（E）-乙烯基膦酸鹽[5′-（E）-VP]（圖2B），新型修飾模式，如增強穩定化學(xué)（ESC）plus（ESC+）（圖2A），以及新型RNAi觸發(fā)結構，如小環(huán)狀干擾RNA（sciRNA）、不對稱(chēng)siRNA和二價(jià)siRNA支架（圖2C）。此外，現在可以使用算法實(shí)現siRNA的設計和修飾。例如，Alnylam已經(jīng)開(kāi)發(fā)了幾代siRNA設計，包括部分修飾的標準模板化學(xué)（STC）、ESC、高級ESC、ESC+和IKARIA?。

       幾種ESC+偶聯(lián)物目前正處于臨床流程中。在專(zhuān)利方面，新型單體、圖案和結構的發(fā)展可以為新來(lái)者提供繞過(guò)現有知識產(chǎn)權的空間。此外，業(yè)務(wù)合作期間的開(kāi)放許可協(xié)議可以為其他公司提供使用siRNA技術(shù)的機會(huì )，促進(jìn)其普及和商業(yè)化。

       4.2建立獨特的遞送系統

       雖然LNP、聚合物、無(wú)機納米顆粒和外泌體等各種納米材料已被開(kāi)發(fā)為siRNA載體，但它們的負載能力、穩定性、安全性和有效性仍然存在局限性。未來(lái)的基礎研究應側重于優(yōu)化這些載體的物理化學(xué)性質(zhì)，并使用獨特的靶向配體或化學(xué)部分特異性結合患病細胞的表面標志物/受體。siRNA可以與配體共價(jià)連接以形成配體-siRNA偶聯(lián)物，這可以降低循環(huán)中的清除率并增強靶向積累和細胞攝取，從而調節其藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)特征。這些配體包括小分子、脂質(zhì)[如膽固醇、2′-O-十六烷基（C16）、各種脂肪酸]、肽（如RGD衍生物、H2009.1、A20FMDV2、胱氨酸結肽）、適配體、抗體、蛋白質(zhì)（如centyrin）、糖類(lèi)（如GalNAc）和非編碼RNA（ncRNA）（圖2D）。

       與納米顆粒相比，配體偶聯(lián)物通常體積小，易于大規模合成，并具有明顯的藥代動(dòng)力學(xué)特性。與脂肪酸等脂質(zhì)部分結合可以改變肝外組織中的積累，從而能夠在包括CNS、心臟、肺和肌肉在內的多種組織中進(jìn)行基因調控?？贵w和細胞表面受體之間的特異性相互作用可能能夠遞送到其他技術(shù)無(wú)法到達的特定組織和/或細胞亞群。單劑量的TfR1抗體（αTfR1）與siRNA偶聯(lián)，在小鼠和猴子中產(chǎn)生超過(guò)75%的mRNA減少，骨骼肌和心臟（橫紋）肌的沉默最嚴重，而其他主要器官的沉默活動(dòng)最少或沒(méi)有。siRNA治療藥物還可以與陽(yáng)離子肽部分（如細胞穿透肽和Endo-Porter）連接，有效穿透組織屏障和細胞膜。此外，siRNA和內體逃逸增強佐劑的組合可能是將配體偶聯(lián)的siRNA遞送至非肝組織的可行策略。

       4.3擴大疾病目標

       siRNA技術(shù)主要用于目標蛋白質(zhì)編碼基因。然而，最近的研究表明，ncRNA，如長(cháng)ncRNA（lncRNA），在各種疾病中起著(zhù)重要作用（圖2E）。因此，開(kāi)發(fā)能夠有效調節ncRNA表達的新型RNA靶向技術(shù)可能為疾病治療提供更廣泛的機會(huì )。此外，探索編碼和ncRNA之間的相互作用，例如競爭性?xún)仍葱訰NA（ceRNA）網(wǎng)絡(luò )，可能會(huì )為疾病機制提供新的見(jiàn)解，并實(shí)現更有效的治療干預。除了在mRNA水平調節基因表達外，siRNA技術(shù)還可以靶向表觀(guān)遺傳修飾，例如DNA甲基化或組蛋白修飾，這些修飾在疾病的發(fā)展和發(fā)展中起著(zhù)至關(guān)重要的作用。通過(guò)調節表觀(guān)遺傳標記，有可能重編程基因表達模式并逆轉疾病表型。

       4.4探索聯(lián)合療法

       利用雙靶向方法或將siRNA與其他治療藥物（如化療藥物、抗體或免疫調節劑）聯(lián)合使用，有望增強療效、克服耐藥性和減少脫靶效應。這些策略可能為治療以前無(wú)法治愈的疾病創(chuàng )造新的機會(huì )。例如，正在實(shí)施一種涉及VIR-2218（GalNAc-siRNA偶聯(lián)物，也稱(chēng)為ALNHBV02）和聚乙二醇-干擾素α(PEG-IFN-α)的聯(lián)合治療，旨在實(shí)現乙型肝炎的功能性治愈。siRNAJNJ-73763989（JNJ-3989）加核苷（t）類(lèi)似物（NA）用于評估有/沒(méi)有衣殼組裝調節劑JNJ-56136379（JNJ-6379）的慢性乙型肝炎患者的治療效果。此外，pozelimab（補體C5靶向抗體）和cemdisiran（一種GalNAc-siRNA偶聯(lián)物）正在聯(lián)合用于治療重癥肌無(wú)力和陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）。此外，正在進(jìn)行Empaveli（一種環(huán)肽）和siRNA組合的臨床前研究，這可能會(huì )降低Empaveli的治療頻率和/或提高治療效果。

       【NO.5】總結和未來(lái)展望

       我們正在見(jiàn)證RNA藥物治療新時(shí)代的到來(lái)。RNA療法基于一個(gè)強大且多功能的平臺，該平臺在解決未滿(mǎn)足的臨床需求方面具有幾乎無(wú)限的潛力。因此，RNA療法注定會(huì )改變許多疾病的護理標準。隨著(zhù)第六種siRNA藥物Rivfloza的獲批，未來(lái)幾年肯定會(huì )有更多的siRNA療法出現。在成功建立用于肝細胞遞送的最先進(jìn)的GalNAc-siRNA偶聯(lián)物后，肝外遞送技術(shù)的探索將成為該領(lǐng)域的下一個(gè)前沿領(lǐng)域（參見(jiàn)臨床醫生專(zhuān)區）。

       與肝臟相比，將RNAi分子遞送到靶向非肝臟疾病的挑戰要大得多。配體-siRNA偶聯(lián)物必須以足夠的速率在靶細胞中積累以實(shí)現沉默。此外，避免同時(shí)進(jìn)行腎臟和網(wǎng)狀內皮清除、增強外滲和組織滲透、增加貨物內化受體低表達細胞類(lèi)型的攝取、改善內體逃逸以及支持強效和安全治療效果等幾個(gè)因素需要進(jìn)行珠子處理以實(shí)現令人滿(mǎn)意的沉默。為了將siRNA的適用性擴大到肝臟組織之外，至關(guān)重要的是：（i）識別或確定可以促進(jìn)有效內化的獨特受體;（ii）提出具體的篩選或勘探策略;（iii）設計并鑒定用于穩健遞送和持續基因沉默的新型配體;（iv）選擇與特定疾病有關(guān)的遺傳或臨床可行的靶基因。如果在臨床條件下肝外遞送變得可行且穩健，則狩獵RNAi療法的領(lǐng)域可能會(huì )顯著(zhù)擴大。

       此外，在siRNA的開(kāi)發(fā)中，與化學(xué)制造和控制（CMC）以及藥物注冊政策相關(guān)的問(wèn)題會(huì )顯著(zhù)影響新藥營(yíng)銷(xiāo)。siRNA的CMC面臨多重挑戰，包括單體供應、質(zhì)量控制、能力建設、雜質(zhì)表征和分離純化。在藥品注冊政策方面，目前還缺乏統一的國際標準。建議通過(guò)加強科學(xué)研究、提高透明度以及修訂法規和政策來(lái)確保臨床試驗的安全性和有效性。

       此外，目前siRNA的主要擴展方向是在慢性疾病領(lǐng)域，如高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥、高血壓、高脂蛋白膽固醇（a）[Lp（a）]心血管疾病、非酒精性脂肪性肝炎（NASH）和乙型肝炎。未來(lái)siRNA藥物開(kāi)發(fā)的突破性方向包括遞送至CNS、眼睛、肌肉、肺和脂肪組織和腫瘤。這為siRNA治療留下了相當大的市場(chǎng)空間。

       盡管存在挑戰（參見(jiàn)懸而未決的問(wèn)題），但siRNA代表了一種有前途的方式，有可能徹底改變各種疾病的治療。為了應對與高效和安全遞送、內體逃逸、體內功效相關(guān)的挑戰，其他方面則需要跨多個(gè)領(lǐng)域的持續創(chuàng )新和合作?？梢钥隙ǖ氖?，經(jīng)過(guò)不懈的努力，這些挑戰將繼續被規避，并最終迎來(lái)進(jìn)一步的重大突破。