目前，制藥行業(yè)關(guān)于注射用水（Water for Injection，WFI）較為普遍接受的微生物限度是10 CFU/100 ml，實(shí)際上，在藥典注射用水的發(fā)展歷史上，這并不一直是WFI的限度。使用10 CFU/100 ml限制可能早于對水系統中生物膜的認識，并且隨著(zhù)時(shí)間的推移而發(fā)展。在USP XXI(1985)中，USP的基本信息章節"藥物用途水"<1231>中添加了"成分水的微生物控制行動(dòng)指南"一節，其中純化水的和注射用水的"可接受的總微生物數量"分別為100CFU/ml和50CFU/ml。該部分也第一次表示，第61章中的USP微生物限度測試不是專(zhuān)門(mén)設計用以測試藥典水的，而且每家公司都應該開(kāi)發(fā)出合適的藥典水測試程序，這一說(shuō)法目前仍然準確。然而，值得注意的是，在USP的材料專(zhuān)論中指定的1000以下的所有章節都是強制性的，而1000以上的所有章節都是指南和非強制性的。這使得這些在<1231>中發(fā)現的微生物數值和陳述僅僅是建議性的。純化水或注射用水的USP專(zhuān)論從沒(méi)有在專(zhuān)題文本中列出這樣的微生物限度數值，而且這是有目的的。

       在1985年USP修訂版之前，所有USP對<1231>的修訂一直沒(méi)有提及建議的微生物水平，盡管大篇幅強調了對微生物和熱原控制的需求。有趣的是，在USP XXII(1990)和USP23(1995)這兩個(gè)USP修訂版本中，第<1231>章載有在"行動(dòng)指南"中的相同一節，其中提及了同樣的對于純化水的100 CFU/ml的基本準則，但沒(méi)有提及對于注射用水的標準，只有相同的對所需微生物和內毒素控制的普通預防措施。直到USP23的補充5(1996年11月15日正式公布)，當出版了對<1231>的重大修訂時(shí)，才將現在熟悉的10 CFU/100 ml建議為"一般認為適當的行動(dòng)限度"。

       然而，這不是USP第一次使用此微生物數值，它曾出現在食品和藥物管理局(FDA)的"高純度水系統檢測指南Guide to Inspections of High Purity Water Systems"(FDA，1993)中，其中10 CFU/100 ml被稱(chēng)為"注射用水的可接受行動(dòng)極限"。在那個(gè)時(shí)候，這份指南明確指出，這個(gè)水平并不是通過(guò)/失敗的明確標準，而是對產(chǎn)品造成影響的任何偏離需要被調查。

       在1976年的這個(gè)時(shí)間之前，FDA寫(xiě)下被稱(chēng)作"LVP GMP"的文件作為聯(lián)邦法典21 CFR 212(Federal Register，1976)的內容，并試圖通過(guò)國會(huì )批準。這些擬議的規定中提到了10 CFU/100 ml的限制。為了預防競爭對手，許多企業(yè)開(kāi)始采用這項擬議法律提出的許多詳細規則，以期望其最終成為法律。但作為法律文本和詳細要求，嚴格上說(shuō)它在許多方面存在缺陷和不合理，制藥業(yè)強烈反對此法律中的許多陳述和限制。擬議的"LVP CGMPs"最終被FDA完全撤回，而第212部分小節從此被重新分配到無(wú)關(guān)的法律中。然而，早期采用CGMPs第212部分中某些要求的使用者們現在將其中一些未被采納的要求作為企業(yè)內控指標。其中存活至今仍較著(zhù)名的是10 CFU/100 ml的"WFI限制"(非行動(dòng)限度)和持續時(shí)間超過(guò)24小時(shí)的冷WFI的"24小時(shí)傾倒規則" (大概是因為能認識到在該時(shí)間段內發(fā)展的微生物污染的風(fēng)險)，以及對WFI系統的采樣期望：對系統進(jìn)行日常采樣和每個(gè)采樣點(diǎn)頻率不低于每周采樣。因此，盡管這21項CFR 212要求從未頒布為法律，但它們以現行監管預期或cGMP(相對于具有法律約束力的CGMP)的形式成為存活至今的常見(jiàn)行業(yè)慣例。

       從那時(shí)起，多年來(lái)僅有幾次短暫中斷，10 CFU/100 ml的數字至今廣泛地被所有藥典用作WFI的"行動(dòng)水平"或"行動(dòng)限制"。只有在歐洲藥典中，其WFI專(zhuān)論中的這一數字被稱(chēng)為"適當的行動(dòng)限度"。其他藥典(包括美國藥典)在其各自的非強制性信息章節中提到這一數字作為一個(gè)行動(dòng)限度，從藥典的角度提出建議。

       但是，無(wú)論何時(shí)數字和測試方法被列入專(zhuān)論，不管其稱(chēng)謂或命名，他們都是憑借藥典的裁判和通過(guò)/失敗的標準(強制程序和在訴訟中的具有法律約束力的限制)。在1993年，美國政府對陣巴爾實(shí)驗室的法院裁決創(chuàng )造了OOS調查(超出標準調查)的概念，這涉及了產(chǎn)品影響調查和實(shí)驗室產(chǎn)生標準偏差時(shí)所需的決策。當FDA發(fā)布了"行業(yè)指導意見(jiàn)：調查藥品生產(chǎn)OOS測試結果"時(shí)，OOS調查概念在1998年由此成為官方調查概念。

       OOS調查僅適用于通過(guò)/失敗標準的偏差(OOS的"S")。然而相反地是，"行動(dòng)限度"（也可稱(chēng)作為"糾偏限度"）是一種過(guò)程控制術(shù)語(yǔ)，旨在應用于過(guò)程監控數據，以檢測過(guò)程何時(shí)偏離正常操作參數或范圍。一個(gè)行動(dòng)限度與一個(gè)過(guò)程有關(guān)，而不是一個(gè)產(chǎn)品。過(guò)程控制措施在報警限度和行動(dòng)限度方面的的用處是在過(guò)程完全失去控制并影響使用水之前發(fā)現異常過(guò)程趨勢,例如水系統中的微生物水平。正確設置之后，報警和行動(dòng)限度會(huì )在水達到不適合使用的極限、即其通過(guò)/失敗標準失敗之前觸發(fā)反應，以使諸如水系統之類(lèi)的過(guò)程重回控制之下。

       因此，報警和行動(dòng)限度應有意設定在遠低于預定水的通過(guò)/失敗標準的水平。超過(guò)行動(dòng)限度(但不是標準)的確需要進(jìn)行調查以找出并糾正原因，但因為尚未超出標準而不會(huì )影響產(chǎn)品,水仍適合使用。一旦超出標準，就需要進(jìn)行OOS調查(其中包括對產(chǎn)品的影響)。

       制造商面臨的困境是，根據FDA和其他監管機構，對于一個(gè)WFI樣品，超過(guò)此10 CFU/100 ml的數值就需要OOS調查(請記住，"S"表示標準)。因此，無(wú)論企業(yè)將其稱(chēng)為行動(dòng)限度，行動(dòng)限制或標準，監管機構認為微生物計數在10 CFU/100 ml及以上是OOS,換句話(huà)說(shuō)，標準未達到。如果調查不能明確證明偏差是由實(shí)驗室引起的或抽樣誤差，則偏差必須被解釋為實(shí)際的標準偏差，并且該水不適合在GMP產(chǎn)品中使用，即使它已經(jīng)被用于那些產(chǎn)品(這是非常有可能的，如果使用常規的長(cháng)期培養測試的話(huà))。

       這種默認的法規解釋非常注重用戶(hù)指定的過(guò)程控制措施觸發(fā)的適用性，測試實(shí)踐的微生物控制以及制造業(yè)用水實(shí)踐的衛生性質(zhì)(必須完全復制從水系統采樣與使用點(diǎn)時(shí)所用的同樣的材料和程序)。因此無(wú)論喜歡與否，超過(guò)10 CFU/100 ml已經(jīng)演變?yōu)闃藴适〉囊环N說(shuō)法，可能導致產(chǎn)品被拒絕，重新加工甚至召回。

       繼續把10 CFU/100 ml稱(chēng)作WFI的行動(dòng)限度將否定其作為過(guò)程控制工具的價(jià)值。超出時(shí)，在標準失敗之前控制過(guò)程已經(jīng)太晚了，這是標準！正因為如此，在最新版本的USP <1231>(正式出現在2016年12月1日的USP 39-補充2)中，不再錯誤地將這10 CFU/100 ml的數字作為一個(gè)行動(dòng)限度。本文認為警戒和行動(dòng)限度應該基于水系統數據趨勢，以幫助用戶(hù)識別何時(shí)水系統可能"漂流"失控，以便可以在其超過(guò)水的使用標準之前重新帶回控制中。需進(jìn)一步指出的是，用戶(hù)應根據自己的水使用情況為自己建立微生物規范，但是對于WFI，標準不應該高于10 CFU/100 ml。

       參考文獻

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       6. FDA，Guide to Inspections of High Purity Water Systems，1993

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       8. 化學(xué)工業(yè)出版社，制藥用水系統，2016

       9. 良好自動(dòng)化生產(chǎn)實(shí)踐指南（第五版）

       專(zhuān)家簡(jiǎn)介：張功臣，制藥行業(yè)專(zhuān)家，主要從事制藥流體與生物工藝系統的研究與實(shí)踐，全國制藥工程設計競賽委員會(huì )專(zhuān)家，ISPE培訓專(zhuān)家，國家藥監局檢查員培訓專(zhuān)家，國家標準《GB50913-2013 醫藥工藝用水系統設計規范》編委。

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