引言：
2025中國藥典對《9101 分析方法驗證指導原則》進(jìn)行了重大修改，進(jìn)一步推進(jìn)了統計學(xué)在分析方法驗證中的應用。如何運用統計學(xué)進(jìn)行驗證數據的報告成為分析工作者亟待解決的難題。
本文將對方法學(xué)驗證中的兩大關(guān)鍵性能指標"準確度和精密度"的數據報告要求進(jìn)行解讀，并詳細的講述如何運用傳統的excel軟件對驗證數據進(jìn)行統計，旨在幫助業(yè)界同仁盡快將法規要求落地實(shí)施。
1. 準確度和精密度的單獨評價(jià)
2025藥典要求：所有的精密度試驗都應報告標準偏差、相對標準偏差（變異系數）和適當的100（1－α）%置信區間或其他合理的統計區間。準確度試驗結果應報告為在試樣中已知添加量分析物的平均回收率，同時(shí)提供合理的100（1－α）%置信區間。
1.1 標準偏差和相對標準偏差
標準偏差和相對標準偏差均用于描述測試結果之間的離散程度，計算公式如下：
1.2 α如何取值
α表示顯著(zhù)性水平，用來(lái)衡量在假設檢驗中，實(shí)驗結果可能出現錯誤的概率。α越小，則出錯的概率越小。通常α取0.05，因為統計學(xué)上認為，如果一件事情的發(fā)生概率只有5%，那么就不太可能發(fā)生。
置信水平=100（1-α）%，當α取0.05時(shí)，置信水平為95%，即：有95%的信心認為真實(shí)的參數值位于計算出的置信區間內。
1.3 置信區間如何計算
置信區間由置信下限 (CL) 和置信上限 (CU)組成，表示總體參數在一定的置信水平下可能出現的范圍為[CL,CU]。
在分析方法驗證中，重復性的樣本量通常為1×6，準確度的樣本量通常為3×3或1×6，均屬于小樣本數據（n＜20），宜采用t分布計算置信區間。公式如下：
式中：df表示自由度n-1；
t1-α/2，df是自由度為df且置信水平為1-α時(shí)的t分布的1-α/2分位數。采用excel計算時(shí)，函數為T(mén)INV（α，df）。
√n采用excel計算時(shí)，函數為SQRT（n）。
1.4 數據報告示例
表1.4.1 重復性結果（示例）
表1.4.2 準確度結果（示例）
2. 準確度和精密度的聯(lián)合評價(jià)
2025藥典提出：準確度和精密度可以聯(lián)合評價(jià)，統計方法可采用預測區間、容忍區間或置信區間，也可采用其他合理的統計學(xué)方法。
從上表可以看出，準確度和精密度的聯(lián)合評價(jià)，本質(zhì)都是通過(guò)對樣品進(jìn)行多次測定，計算出結果可能出現的范圍，當此范圍可接受時(shí)，即可認為方法準確。因此，準確度和精密度聯(lián)合評價(jià)的前提是：已獲得樣品的真值或可接受的參比值。
聯(lián)合評價(jià)的實(shí)驗設計：①對于含量測定方法，原料藥可用已知純度的對照品或供試品進(jìn)行多次測定；制劑可在處方量空白輔料中，加入已知量被測物對照品進(jìn)行多次測定。②對于雜質(zhì)測定方法，可向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)對照品進(jìn)多次行測定。
細心的讀者會(huì )發(fā)現，聯(lián)合評價(jià)的實(shí)驗設計思路與單獨的準確度實(shí)驗一致，只是結果判定的計算方式不同，且省略了精密度實(shí)驗?。?！因為精密不一定準確，但準確一定精密，聯(lián)合評價(jià)通過(guò)充分的準確度實(shí)驗同時(shí)表征方法的準確度和精密度。為了保證"聯(lián)合評價(jià)"的可靠性，樣本量至少≥10。
數據示例：對某一原料藥的含量測定方法進(jìn)行準確度和精密度的聯(lián)合驗證。取已知純度為99.8%的對照品，按照供試品溶液的配制方法，平行配制10份。
從上述統計結果可以看到，三種不同的統計方式所得到的區間范圍大不相同。2025藥典提出：一種統計學(xué)方法不一定適用于所有情況。如不適用，其他統計學(xué)方法可用于方法驗證結果的評價(jià)。那么，實(shí)際運用過(guò)程中，到底以哪一種統計方式為準呢？
筆者認為：基于統計學(xué)的分析方法學(xué)驗證，本質(zhì)是通過(guò)驗證表征方法的總體性能，并以此預測未來(lái)質(zhì)量控制時(shí)的風(fēng)險。這種方式更為科學(xué)，卻對分析方法驗證的實(shí)驗樣本提出更高的要求，因為統計結果的可靠性與樣本量的大小密切相關(guān)，過(guò)小的樣本量可能導致統計區間過(guò)寬，從而失去實(shí)際決策意義，但足夠的樣本量需要企業(yè)付出更高的實(shí)驗成本。通常驗證的樣本量＜20，綜合考量統計方式對樣本量的敏感性，建議優(yōu)先選擇"預測區間"，其次選擇"置信區間"。
注：筆者水平有限，不足之處在所難免，請各位老師批評指正。
參考文獻：
【1】《9101 分析方法驗證指導原則》
【2】《9097分析數據的解釋與處理指導原則》
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