2018年中期，中國浙江某企業(yè)某原料藥品種被檢測出亞硝胺雜質(zhì)，進(jìn)而引發(fā)了一場(chǎng)波及全球的監管風(fēng)暴。雖然經(jīng)過(guò)幾年波折，此事對中國國內市場(chǎng)的影響已經(jīng)平靜下來(lái)，但是歐美藥政當局對此問(wèn)題持續關(guān)注和強化，并沒(méi)有很多退讓的動(dòng)作。近期，FDA又發(fā)布了針對NDSRI的指南，針對這一類(lèi)新發(fā)現的亞硝胺雜質(zhì)提出自己新的控制策略。此文將介紹相關(guān)技術(shù)細節，希望對意圖進(jìn)入美國市場(chǎng)的企業(yè)有所裨益。

       為了讓讀者閱讀本文時(shí)不至于太乏味，本文以問(wèn)答形式來(lái)體現FDA對亞硝胺雜質(zhì)控制的最新要求。

       問(wèn)題01-FDA在過(guò)去發(fā)布過(guò)哪些控制亞硝胺雜質(zhì)的指南？

       答復：在2020年9月，FDA發(fā)布《Control of Nitrosamine Impurities in Human Drugs》草案。隨后在2021年2月，FDA發(fā)布《Control of Nitrosamine Impurities in Human Drugs》的第一修訂版。

       問(wèn)題02-FDA《Control of Nitrosamine Impurities in Human Drugs》中討論的亞硝胺雜質(zhì)和2023年8月FDA發(fā)布的《Recommended Acceptable Intake Limits for Nitrosamine Drug Substance-Related Impurities (NDSRIs) 》中討論的NDSRI有什么不同？

       答復：先介紹一下2023年FDA指南提到的NDSRI。這個(gè)概念如果翻譯成中文，就是亞硝胺類(lèi)活性成分有關(guān)雜質(zhì)。從定義和指南描述可以看出，NDSRI是一類(lèi)結構和API相似，具有唯一性的亞硝胺雜質(zhì)。這類(lèi)NDSRI雜質(zhì)主要在制劑中出現，是由API和輔料中亞硝化劑導致的；自然，在部分原料藥中，由于高溫流化床工藝或者氣流磨粉工藝，也會(huì )出現NDSRI。

       而FDA在2021年2月修訂的《Control of Nitrosamine Impurities in Human Drugs》中提到的亞硝胺雜質(zhì)是各類(lèi)藥品中常見(jiàn)的NDMA/NDEA這一類(lèi)小分子雜質(zhì)。

       問(wèn)題03-FDA對小分子亞硝胺雜質(zhì)控制工作時(shí)間表是怎樣的？

       針對小分子亞硝胺雜質(zhì)的控制，FDA202102修訂《Control of Nitrosamine Impurities in Human Drugs》提到的時(shí)間表，是有區分的：

       ---對于已經(jīng)上市藥品，在原始指南發(fā)布的7個(gè)月內進(jìn)行風(fēng)險評估，并應在2021年3月31日之前完成評估。MAH應該隨之盡快啟動(dòng)確認測試，應該在原始指南發(fā)布3年內啟動(dòng)確認測試和啟動(dòng)相關(guān)變更；完成這些工作的截止日期是2023年10月1日。

       ---對于還沒(méi)有申報的產(chǎn)品，FDA建議DMF持有者和藥品MAA在申報之前啟動(dòng)風(fēng)險評估，并根據風(fēng)險評估結果啟動(dòng)確認測試。如果在申報之前沒(méi)有完成這些工作，建議在申報之后，根據需要啟動(dòng)確認測試和啟動(dòng)相關(guān)技術(shù)變更。

       ---對于已經(jīng)遞交申請還處于審評階段的產(chǎn)品，FDA建議申請人盡快啟動(dòng)風(fēng)險評估，并進(jìn)行確認測試。如果確認測試發(fā)現雜質(zhì)水平高于A(yíng)I限度，應該及時(shí)通知FDA并啟動(dòng)變更。如果確認測試發(fā)現雜質(zhì)水平低于A(yíng)I限度但是高于定量限，應該進(jìn)行相關(guān)修訂。

       問(wèn)題04-針對NDSRI這類(lèi)雜質(zhì)，FDA建議的工作時(shí)間表是怎樣的？

       答復：

       --- 針對已經(jīng)上市藥品，制造商和申請人應在本指南發(fā)布后3個(gè)月內重新評估風(fēng)險，建議完成日期為2023年11月1日，以此作為整體風(fēng)險管理的一部分。一旦發(fā)現NDSRI的風(fēng)險，應立即開(kāi)始使用靈敏和適當的驗證方法進(jìn)行確認測試。如果在藥品中檢測到NDSRI的水平超過(guò)了推薦的AI限度（例如根據其預測的致癌效力類(lèi)別計算），那么FDA建議制造商和申請人制定控制策略和/或設計方法，將NDSRI控制在可接受的水平內。如果確認測試顯示雜質(zhì)水平高于A(yíng)I限度，FDA建議在2025年8月1日前提交各類(lèi)變更的申請。

       ---對于還未申報的藥品，FDA建議申請人在提交原始申請之前對NDSRI進(jìn)行風(fēng)險評估，并在適當的情況下進(jìn)行確認測試。然而，如果在原始申請提交時(shí)尚未進(jìn)行風(fēng)險評估和確認測試，風(fēng)險評估和確認測試結果以及對DMF或申請的變更可以在修訂申請中提交。

       ---對于已經(jīng)提交申請還處于審評階段的藥品，MAA應迅速進(jìn)行風(fēng)險評估，如果確認測試發(fā)現NDSRI水平高于本指南中建議的AI限度，應通知FDA。如果檢測到NDSRI高于建議的AI限度，申請人應酌情修改申請信息。FDA將與申請人合作，努力解決審查周期內的問(wèn)題。各項工作完成時(shí)間要符合PDUFA和GDUFA給定的時(shí)間表。

       問(wèn)題05-為什么FDA在2023年8月發(fā)布的《Recommended Acceptable Intake Limits for Nitrosamine Drug Substance-Related Impurities (NDSRIs)》沒(méi)有經(jīng)歷征集意見(jiàn)階段？

       答復：

       根據FDA一般工作慣例，FDA會(huì )先發(fā)布指南草案，征集意見(jiàn)結束后再轉換為定稿指南。然后，根據FDA掌握的信息，基于原料藥的化學(xué)結構，很多制劑中會(huì )含有NDSRI這類(lèi)雜質(zhì)，必須給予快速應對和處理。在本指南發(fā)布實(shí)施后，行業(yè)人士還可以繼續通過(guò)郵寄方式或者在線(xiàn)方式反饋技術(shù)建議。

       問(wèn)題06-FDA在2023年8月發(fā)布的《Recommended Acceptable Intake Limits for Nitrosamine Drug Substance-Related Impurities (NDSRIs)》適用于原料藥嗎？

       答復：盡管根據科學(xué)研究，確認NDSRI主要是制劑中API和輔料中亞硝化劑反應生成，但是部分原料藥由于要經(jīng)歷高溫流化床工藝或者氣流磨粉工藝，也會(huì )出現NDSRI，因此這份指南適用于藥品制劑和原料藥。

       問(wèn)題07- FDA在2023年8月發(fā)布的《Recommended Acceptable Intake Limits for Nitrosamine Drug Substance-Related Impurities (NDSRIs)》準確適用范圍？

       答復：根據問(wèn)題的性質(zhì)，這份指南適用于藥品，包括已批準或待批NDA或ANDA涉及的處方藥和非處方藥產(chǎn)品，以及未根據藥品申請監管而上市的商品，包括受FDCA（即 OTC專(zhuān)論藥物），或以其他方式受CGMP的約束的產(chǎn)品。本指南也適用于臨床開(kāi)發(fā)中的處方藥和非處方藥產(chǎn)品。此外，本指南適用于含有化學(xué)合成片段的生物制品或含有藥物成分的生物主導的組合產(chǎn)品，無(wú)論此類(lèi)產(chǎn)品正在開(kāi)發(fā)中還是已批準或正在申請BLA。本指南中的建議適用于藥品和原料藥制造商。

       問(wèn)題08- FDA在2023年8月發(fā)布的《Recommended Acceptable Intake Limits for Nitrosamine Drug Substance-Related Impurities (NDSRIs)》準確不適用于哪些藥品？

       答復：這份新指南不適用于用于晚期癌癥患者的產(chǎn)品中檢測到的NDSRI（即屬于ICH指南S9抗癌藥物非臨床評估范圍內的藥品）。ICH S9原則、ICH Q3A（R2）雜質(zhì)指南和ICH Q3B（R2）雜質(zhì)指南可用于為這些晚期癌癥用藥產(chǎn)品設定雜質(zhì)標準。

       問(wèn)題09-目前FDA針對各類(lèi)亞硝胺雜質(zhì)推薦的工作流程是什么？

       答復：根據2021年2月修訂的亞硝胺指南，流程如下：（1）對其原料藥和藥品中的亞硝胺進(jìn)行風(fēng)險評估;（2）如果發(fā)現風(fēng)險，則進(jìn)行確認性測試;（3）報告為防止或減少已批準和待審評的NDA和ANDA中API和藥品中亞硝胺雜質(zhì)的存在而實(shí)施的變更工作。上述工作流程也適用于針對NDSRI的各項工作。

       問(wèn)題10-將雜質(zhì)AI限度折算為ppm形式的公式是什么？

       答復：根據FDA在2023年8月發(fā)布的《Recommended Acceptable Intake Limits for Nitrosamine Drug Substance-Related Impurities (NDSRIs)》，計算公式是：

       ppm = AI（納克 （ng））/MDD（毫克）

       其中，AI是NDSRI雜質(zhì)接受限度，MDD是藥品標簽上的日劑量。

       問(wèn)題11-為什么對NDSRI雜質(zhì)確定安全限度很具有挑戰性？

       答復：FDA在2023年8月發(fā)布的《Recommended Acceptable Intake Limits for Nitrosamine Drug Substance-Related Impurities (NDSRIs)》，確定NDSRIs的AI限度通常比確定小分子亞硝胺雜質(zhì)的AI限度更具挑戰性，主要是因為NDSRIs對于每個(gè)API都是唯一的；因此，NDSRIs通常存在有限或沒(méi)有足夠的安全數據（例如嚙齒動(dòng)物致癌性數據）。FDA已經(jīng)在官網(wǎng)發(fā)布了有限數量的NDSRI的推薦AI限度，但與更常見(jiàn)的亞硝胺（例如亞硝胺指南中確定的那些雜質(zhì)）不同， 目前尚未確定大多數NDSRI的建議AI限度。

       問(wèn)題12-確定NDSRI雜質(zhì)限度，主要依據哪些數據庫信息？

       答復：目前FDA建立NDSRI安全限度，主要依據致癌性數據可從致癌效力數據庫（CPDB）或Lhasa致癌性數據庫（LCDB）獲得。

       問(wèn)題13-如果為某個(gè)NDSRI選擇替代化合物進(jìn)行風(fēng)險評估，主要考慮哪些技術(shù)因素？

       答復：根據FDA在2023年8月發(fā)布的《Recommended Acceptable Intake Limits for Nitrosamine Drug Substance-Related Impurities (NDSRIs)》，主要考慮取代程度、空間位阻大小、電子影響、代謝激活潛力、所得代謝物的穩定性/反應性以及總分子量。

       問(wèn)題14-有哪些常見(jiàn)的化合物被推薦為替代化合物？

       答復：根據FDA在2023年8月發(fā)布的《Recommended Acceptable Intake Limits for Nitrosamine Drug Substance-Related Impurities (NDSRIs)》，推薦采用：NDMA、N-亞硝基哌啶（NPIP）、4-（甲基亞硝基氨基）-1-（3-吡啶基）-1-丁酮（NNK）、N-亞硝基吡 咯烷（NPYR）和N-亞硝基嗎啉（NMOR）

       問(wèn)題15-采用2023年8月FDA指南中推薦的構效關(guān)系方法來(lái)推測NDSRI的AI限度，是否適用于各類(lèi)亞硝基結構物質(zhì)？

       答復：不是。根據FDA在2023年8月發(fā)布的《Recommended Acceptable Intake Limits for Nitrosamine Drug Substance-Related Impurities (NDSRIs)》，這份指南描述的預測致癌效力分類(lèi)方法適用于在N-亞硝基兩側攜帶碳原子的NDSRI，其中碳不直接與雜原子雙鍵相連（即N-亞硝基酰胺，N-亞硝 基 脲，N-亞硝基胍和其他相關(guān)結構被排除在外）。此外，預測的致癌效力分類(lèi)方法不適用于N-亞硝基位于芳環(huán)內的NDSRI（例如亞硝化吲哚）。

       問(wèn)題16-如果藥品MAA或者M(jìn)AH發(fā)現自己確定雜質(zhì)AI限度和FDA推薦的不一致，如何辦？

       答復：FDA鼓勵MAA和MAH和FDA進(jìn)行充分溝通。如果MAA或者M(jìn)AH發(fā)現新的數據和工作思路，都可以和FDA進(jìn)行溝通，并提出修訂NDSRI的AI限度的建議。

       問(wèn)題17-是否FDA在2023年8月發(fā)布的NDSRI指南推薦方法是唯一的方法？

       答復：不是。FDA在2023年8月發(fā)布的《Recommended Acceptable Intake Limits for Nitrosamine Drug Substance-Related Impurities (NDSRIs)》推薦的使用構效關(guān)系預測NDSRI限度的方法是針對各類(lèi)NDSRI的通用方法；如果FDA在某些特殊情況下已經(jīng)另行向制藥企業(yè)建議AI限度（例如基于化合物特異性評估或來(lái)自替代化合物的交叉分析），則需要采用這些特定情況下確定的AI限度。

       問(wèn)題18-根據FDA在2023年8月發(fā)布的NDSRI指南，NDSRI分為幾類(lèi)？限度如何？

       答復：參見(jiàn)下表：

       說(shuō)明：上面這個(gè)表格不是指南原表格，已經(jīng)進(jìn)行了簡(jiǎn)化。

       問(wèn)題19-根據FDA在2023年8月發(fā)布的NDSRI指南，進(jìn)行構效關(guān)系計算的公式是怎樣的？

       答復：

       雜質(zhì)致癌風(fēng)險得分=α-氫分值+失活特征分值（NDSRI中存在的特征的所有得分總和）+活化特征分值（NDSRI中存在的特征的所有得分總和）

       根據上面公式計算每個(gè)雜質(zhì)的結構，得分越高的風(fēng)險越低，限度值越高；得分越低的風(fēng)險越高，限度值越低。

       問(wèn)題20-目前FDA對哪些API對應的NDSRI進(jìn)行了限度計算并提供信息？

       答復：FDA在如下網(wǎng)址更新了技術(shù)信息：

       https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/updated-information-recommended- acceptable-intake-limits-nitrosamine-drug-substance-related

       從上面截圖可以看出，FDA已經(jīng)計算了247個(gè)藥品的NDSRI限度，相關(guān)MAA/MAH可以采用上述信息。

       問(wèn)題21-如果MAA/MAH擬對自己產(chǎn)品中的雜質(zhì)實(shí)施Ames試驗，FDA有哪些信息可以推薦?

       答復：為了讓MAA/MAH提供安全信息，網(wǎng)址如下：

       https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/updated-information-recommended-acceptable-intake-limits-nitrosamine-drug-substance-related

       如果進(jìn)行Ames試驗，FDA建議使用OECD471指南中描述的完整測試菌株，使用預培養法，并將大鼠和倉鼠的S9分數以30%的濃度添加到實(shí)驗體系中。

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       作者簡(jiǎn)介：zhulikou431，高級工程師、PDA會(huì )員、ISPE會(huì )員、ECA會(huì )員、PQRI會(huì )員、資深無(wú)菌GMP專(zhuān)家，在無(wú)菌工藝開(kāi)發(fā)和驗證、藥品研發(fā)和注冊、CTD文件撰寫(xiě)和審核、法規審計、國際認證、國際注冊、質(zhì)量體系建設與維護領(lǐng)域，以及無(wú)菌檢驗、環(huán)境監控等領(lǐng)域皆具有較深造詣。近幾年開(kāi)始著(zhù)力關(guān)注制藥宏觀(guān)領(lǐng)域趨勢分析和制藥企業(yè)并購項目的風(fēng)險管理工作。